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生化培養(yǎng)箱多管發(fā)酵法與濾膜法介紹

發(fā)布日期:2015-01-20點擊次數(shù):3110

 一、多管發(fā)酵法

1.初發(fā)酵實驗
生化培養(yǎng)箱發(fā)酵管內(nèi)裝有單倍或三倍乳糖蛋白胨培養(yǎng)液,并在內(nèi)倒置有小玻璃管。每個樣品用三個不同的水樣量接種,同一接種水樣量要有五管,將水樣分別接種到裝有乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的 生化培養(yǎng)箱發(fā)酵管中,在37℃±0.5℃下培養(yǎng)24h±2h。乳糖能起選擇作用,因為很多細菌不能發(fā)酵乳糖,而大腸菌群能發(fā)酵乳糖并產(chǎn)酸產(chǎn)氣。培養(yǎng)液中加入溴甲酚紫作為酸度指示劑,細菌產(chǎn)酸后,培養(yǎng)液即由原來的紫色變成黃色。產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管表明試驗陽性,如在倒管內(nèi)產(chǎn)氣不明顯,可輕拍發(fā)酵管,有小氣泡升起為陽性。

2.復發(fā)酵實驗 
輕微振蕩初發(fā)酵試驗陽性結(jié)果的 生化培養(yǎng)箱發(fā)酵管,用3mm接種環(huán)將培養(yǎng)物(2-3環(huán))轉(zhuǎn)接到EC培養(yǎng)液中,在44.5℃±0.5℃下培養(yǎng)24h±2h(提高培養(yǎng)溫度可造成不利于來自自然環(huán)境的大腸菌群的生長)。培養(yǎng)后立即觀察,發(fā)酵管產(chǎn)氣則證實為糞大腸菌群陽性。


二、濾膜法
生化培養(yǎng)箱濾膜是一種微孔性濾膜,孔徑0.45μm。將水樣注入已滅菌的放有濾膜的過濾器中,經(jīng)過抽濾,細菌即被截留在膜上,然后將濾膜貼于M-FC培養(yǎng)基上,在44.5℃±0.5℃下培養(yǎng)24 h±2h。糞大腸菌群菌落在M-FC培養(yǎng)基上呈藍色或藍綠色,其他非糞大腸菌群菌落成灰色、淡黃色或無色。正常情況下,由于溫度和玫瑰酸鹽試劑的選擇性作用,在M-FC培養(yǎng)基上很少見到非糞大腸菌菌落。

 

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